Coordenação: Noeli Juarez Ferla
Pesquisador(a):
Noeli Juarez Ferla
Liana Johann
Guilherme Liberato da Silva
Calebe Fernando Juchem
Amália Luisa Winter Berté
Vinícius Leão da Silva
Darliane Evangelho Silva
Juliana Granich
Joseane Moreira do Nascimento
Luiz Liberato Costa Corrêa
Maicon Toldi
Fontes Financiadoras:
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do RS - FAPERGS
Resumo:
Este projeto de pesquisa tem o objetivo de avaliar os efeitos local e sistêmico do ataque dos ácaros fitófagos Panonychus ulmi, Polyphagotarsonemus latus e Tetranychus urticae em processos fisiológicos de Vitis vinifera, varietal Chardonnay, além da quantificação do potencial e capacidade de dano provocado pelos mesmos. Serão utilizadas estacas de videiras Vitis vinifera, varietal Chardonnay, obtidas da coleção de plantas da Embrapa Uva e Vinho de Bento Gonçalves (RS). Procedimento especial será realizado com as estacas para a obtenção de mudas em laboratório. A metodologia cultivo das plantas é adaptada Díaz-Riquelme et al. (2016). Criações estoque de ácaros. Panonychus ulmi. Espécimes de P. ulmi serão coletados em videiras da varietal Merlot em municípios da Serra Gaúcha, estado do Rio Grande do Sul. A metodologia de criação é aquela adaptada de Herbert (1981) e Johann (2014). Tetranychus urticae. Espécimes de T. urticae serão coletados em videiras da varietal Chardonnay em Garibaldi Serra Gaúcha, estado do Rio Grande do Sul. Polyphagotarsonemus latus. Espécimes de P. latus serão coletados em folhas de videira trazidas do campo em municípios da Serra Gaúcha, estado do Rio Grande do Sul. Todas as criações estoque de ácaros serão mantidas em laboratório sobre e mantidos em laboratório em plantas de Vitis vinifera, varietal Chardonnay, à temperatura de 25±1°C, umidade relativa de 70±5% e fotofase de 14 horas. Avaliação e quantificação de dano. Folhas de plantas de Vitis vinifera, varietal Chardonnay serão expostas ao ataque de P. ulmi, P. latus e T. urticae em diferentes tempos de exposição e diferentes quantidades de ácaros por folha. Serão transferidas fêmeas de cada espécie para as folhas e o monitoramento será realizado de acordo com o determinado. Após transcorrido o tempo de infestação, a folha será removida da planta e escaneada, para posterior análise com software Gimp para seleção e quantificação de todas as manchas associadas com a alimentação dos ácaros. Análise de expressão gênica. Folhas de plantas de Vitis vinifera, varietal Chardonnay serão expostas ao ataque de P. ulmi, P. latus e T. urticae em tempo de exposição de 24 horas. Serão inoculadas 50 fêmeas de P. ulmi, P. latus e T. urticae em cada folha, sendo realizadas ove repetições para cada espécie de ácaro, e três plantas não tratadas serão usadas como controle de cada experimento. Após 24 horas do experimento, será realizada a remoção das folhas e imediato congelamento em nitrogênio líquido e posteriormente em ultra freezer a -80ºC, para evitar a degradação do RNA. Posteriormente será realizada a extração de RNA total, utilizando o kit de extração Spectrum Plant Total RNA Kit (Sigma Aldrich), sendo este kit já validado para extração em folhas de videira, conforme fabricante. O RNA extraído será quantificado e sua qualidade verificada em gel de agarose. Caso necessário, o RNA deverá ser purificado em cloreto de lítio (LiCl). As análises serão realizadas no Laboratório de Análises Moleculares do Tecnovates – Univates. Cada amostra será avaliada em três repetições técnicas e três repetições biológicas, totalizando nove plantas avaliadas e mais três controles, por ácaro. As amostras de RNA serão submetidas ao sequenciamento total em local a ser definido, inclusive para a realização das análises de bioinformática. As leituras serão mapeadas utilizando o genoma de videira como referência utilizando STAR aligner. A contagem das leituras será gerada utilizando HTSeq ao nível de locus gênico e a análise da expressão gênica diferencial será realizada utilizando o voom / limma workflow para genes que demonstraram nível de expressão de pelo menos 1 contagem por milhão (CPM) em pelo menos 4 amostras (LAW et al., 2014). Será utilizado o software Bioconductor, algoritmo PAGE e Gene Ontology para classificar os genes em conjuntos e ferramenta Blast2GO, para identificar processos biológicos em genes diferencialmente expressos. A análise de ontologia gênica será realizada com o software top GO com teste estatístico de Fisher para gerar a lista de genes diferencialmente expressos, valor de p=0,05. Resultados e impactos esperados. Através deste projeto, pretendemos compreender o mecanismo de interação entre P. ulmi, P. latus e T. urticae e Vitis vinifera varietal Chardonnay, para determinar um limiar de dano que possa ser tolerável pela planta e que altere processos fisiológicos que possam ser benéficos, além de compreender qual a melhor forma de controle deste ácaro, reduzindo a utilização desnecessária de agroquímicos. Com o preenchimento das lacunas existentes, será possível oportunizar o estabelecimento de estratégias de manejo que enfatizem a preservação de inimigos naturais e a utilização de estratégias limpas no controle destas espécies e o uso de estratégias que aumentem as concentrações de substâncias desejadas nas bagas, com potencial aumento de valor agregado e melhorando a qualidade de vida dos produtores.